Biologi tentang hiu banteng masih sedikit diketahui tapi hiu banteng menunjukkan adaptasi fisik yang luar biasa yang memungkinkan untuk bertahan baik di air tawar maupun air laut. Hiu banteng telah ditangkap di tempat yang tidak terbayangkan dimana hiu dapat ditemukan; di kaki bukit Andes Peru, 3.700 kilometer menyusuri Sungai Amazon, dan di Danau Nikaragua, danau terbesar di Amerika Tengah. Namun, hiu banteng tidak dapat menyelesaikan seluruh siklus hidupnya di air tawar, dan semua hiu di air tawar membutuhkan akses menuju air asin melalui sungai dan muara (2) (3). Hiu banteng berenang perlahan dan dekat ke bagian dasar perairan, menyembunyikan diri untuk mengejutkan dan menyerang mangsanya dengan kecepatan tinggi (2), dan mungkin hiu banteng ini merupakan salah satu spesies hiu tropis yang paling berbahaya, seperti yang sering dikutip (2) (5) (6). Bersamaan dengan hiu putih dan hiu macan, hiu banteng bertanggung jawab atas insiden yang paling banyak melibatkan manusia (2); akibat dari kecenderungan yang besar untuk memangsa dan kedekatan habitatnya dengan keberadaan manusia (2). Makanan hiu banteng sangat beragam termasuk ikan bertulang belakang, spesies hiu lain (bahkan terkadang hiu banteng yang masih muda), penyu laut, burung, lumba-lumba, dan mamalia terestrial (2). Hiu banteng termasuk hewan vivipar, melahirkan 1-13 anak setelah masa kehamilan 10-11 bulan (2). Hiu betina melahirkan di akhir musim semi dan awal musim panas baik di bagian estuari, muara sungai dan dan danau air tawar (2). Perkawinan terjadi di waktu yang sama setiap tahunnnya, namun tidak diketahui di mana persisnya karena belum pernah diamati secara langsung (4).